Achievements
一步酶法從頭孢菌素c（ CPC） 生產(chǎn)7－氨基頭孢烷酸（7-ACA） 是繼我們研發(fā)的兩步酶法工藝成功應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)以后,，在生產(chǎn)頭孢菌素類抗生素醫(yī)藥中間體技術(shù)的又一個(gè)突破,。與化學(xué)法和兩步酶法相比，一步酶法有工藝簡單,、環(huán)保和轉(zhuǎn)化率高,、產(chǎn)品質(zhì)量好等優(yōu)點(diǎn),。該技術(shù)采用基因工程技術(shù)對 CPC 酰化酶（一步酶法用酶）的基因進(jìn)行了改造,，獲得了能夠高效催化 CPC 到 7-ACA 的突變基因,。通過我們自己構(gòu)建的高效啟動(dòng)子 HP 以及優(yōu)化組合的調(diào)控表達(dá)元件，構(gòu)建并篩選出了能夠高效,、高活性表達(dá)一步酶法用酶——CPC ?；傅幕蚬こ碳?xì)胞株。這是國內(nèi)第一個(gè)使得 CPC ?；富钚阅軌蜻_(dá)到工業(yè)應(yīng)用水平的技術(shù),。由于采用了高效的表達(dá)系統(tǒng)和穩(wěn)定的質(zhì)粒，以及組成型表達(dá)結(jié)構(gòu)，使得該基因工程菌遺傳特性非常穩(wěn)定,，在發(fā)酵制酶的過程中不需要添加任何抗生素和誘導(dǎo)劑就可以實(shí)現(xiàn)高效,、高活性表達(dá)。在高效表達(dá) CPC ?；傅幕A(chǔ)上,，我們通過在表達(dá)基因上同時(shí)引入的特殊基因序列，使得蛋白的純化和固定化工藝一步進(jìn)行,。通過自己開發(fā)研制的可重復(fù)使用的固定化載體,，可以使得固定化酶活性達(dá)到 60U/g 以上。
采用我們研制的特異性純化介質(zhì),，可以從菌體破碎液中一步純化和固定化 CPC ?；福甘章试?90 ％以上,，固定化酶活達(dá)到 60U/g 以上,。固定化酶可以重復(fù)使用 20 批以上，純化和固定化用載體可以重復(fù)使用,。
菌 種：基因工程大腸桿菌,，卡那抗性，組成型表達(dá),。
發(fā)酵溫度：37℃
培 養(yǎng) 基：普通的大腸桿菌培養(yǎng)基,，主要成分有玉米漿等廉價(jià)的營養(yǎng)源。
發(fā)酵周期：20小時(shí)
發(fā)酵酶活：3U/ml 以上（5升發(fā)酵罐）
特 點(diǎn)：遺傳特性穩(wěn)定,，不需要添加誘導(dǎo)劑和抗生素,，工藝簡單。
小試技術(shù)轉(zhuǎn)讓或合作進(jìn)行中試,。
醫(yī)療衛(wèi)生,。
